Диагностикум для идентификации коагулазо-положительных стафилококков в реакции агглютинации, жидкий

Набор реагентов состоит из двух компонентов: Диагностикум, который представляет собой 1 %-ную взвесь стабилизированных бараньих эритроцитов, сенсибилизированных фибриногеном, в фосфатно-солевом растворе; Отрицательный контрольный диагностикум (К-), который представляет собой 1 %-ную взвесь стабилизированных бараньих эритроцитов в фосфатно-солевом растворе.

1. Назначение

Идентификация коагулазо-положительных стафилококков, выделенных из клинического материала, пищевых продуктов и объектов внешней среды. Область применения – Клиническая лабораторная диагностика.

2. Характеристика набора
2.1. Принцип действия

Патогенные стафилококки Staphylococcus aureus имеют на своей поверхности экстрацеллюлярный фермент - коагулазу, способный связывать фибриноген крови. Диагностикум представляет собой 1%-ную взвесь стабилизированных бараньих эритроцитов в фосфатно-солевом растворе, сенсибилизированных фибриногеном. Диагностикум и клетки коагулазо-положительных стафилококков взаимодействуют, в результате чего происходит агглютинация бараньих эритроцитов вследствие фибриноген-связывающей активности коагулазы золотистого стафилококка.

2.2. Состав набора

• Диагностикум для идентификации коагулазо-положительных стафилококков в реакции коагглютинации, жидкий – 1 фл. -2,5 мл.;

• Отрицательный контрольный диагностикум (К-) – 1 фл. -2,5 мл.

3. Описание

Диагностикум и Отрицательный контрольный диагностикум (К-) - гомогенные взвеси коричневого цвета, которые при стоянии разделяются на плотный осадок коричневого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и прозрачную бесцветную надосадочную жидкости. При хранении допускается изменение цвета надосадочной жидкости на светло-желтый или светло-коричневый.

4. Аналитические и диагностические характеристики набора.

Исследуемый материал расценивается как положительный в отношении коагулазоположительного стафилококка при наличии положительной реакции агглютинации с Диагностикумом. При этом реакция агглютинации должна отсутствовать при смешивании исследуемого материала с Контрольным диагностикумом (выявление неспецифических реакций). Результат реакции не считается положительным при наличии агглютинации Контрольного диагностикума и исследуемого материала (неспецифическая реакция).

Диагностическая характеристика набора идентификация коагулазо-положительных стафилококков, выделенных из клинического материала, пищевых продуктов и объектов внешней среды.

 
5. Меры предосторожности.

5.1. Потенциальный риск применения набора – класс 1.

5.2. Все компоненты набора являются нетоксичными.

5.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 529205-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности» и СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных инфекций».

5.4. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны быть соответствующим образом промаркированы и храниться отдельно.

5.5. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, предназначенных для работы с набором.

5.6. При подготовке к проведению анализа следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом:

- работать в резиновых перчатках;

- не пипетировать растворы ртом;

Удалять неиспользованные реактивы необходимо в соответствии с требованиями СП 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений», МУ 287-113 по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения.

6. Оборудование и материалы.

При применении набора для постановки анализа используют:

- термостат, поддерживающий температуру 37±1 °С;

- холодильник бытовой;

- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющими отбирать объемы жидкости от 5 до 5000 мкл (погрешность не более 5%);

- перчатки резиновые хирургические;

- бумага фильтровальная лабораторная;

- флаконы стеклянные вместимостью 15 мл;

- пробирки вместимостью 2 мл;

- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 1000 мл;

- колба вместимостью 1000 мл;

- вода очищенная.

7. Способ применения
7.1. Постановка реакции агглютинации.

Все компоненты для проведения анализа перед использованием должны быть выдержаны не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 °С. Перед проведением реакции Диагностикум и Отрицательный контрольный диагностикум (К–) тщательно взбалтывают до образования однородной гомогенной взвеси.

7.2. Приготовление микробной суспензии

В пробирку с 1 мл стерильного 0,85 % раствора натрия хлорида вносят одну петлю суточной исследуемой культуры, выращенной на скошенном питательном агаре, и тщательно перемешивают.

7.3. На предметное стекло наносят по одной капле Диагностикума для идентификации коагулазо-положительных стафилококков и Отрицательного контрольного диагностикума (К-). К диагностикумам добавляют 1 каплю исследуемой микробной суспензии.

7.4. Каждую пробу тщательно перемешивают отдельной палочкой, затем стекло покачивают круговыми движениями в течение 1 мин, после чего учитывают реакцию визуально.

8. Учет результатов

Учёт результатов реакции проводят при нормальном освещении без использования оптических приборов.

Реакцию агглютинации Диагностикума для идентификации коагулазо-положитель-ных стафилококков с исследуемой суспензии оценивают как положительную при наличии хлопьев коричневого цвета с полным просветлением фона; как отрицательную реакцию при наличии мутной взвеси коричневого цвета без хлопьев. Реакцию агглютинации Отрицательного контрольного диагностикума (К–) с исследуемой суспензии оценивают как отрицательную при наличии мутной взвеси коричневого цвета. Результат реакции не считается положительным при наличии агглютинации Отрицательного контрольного диагностикума (К–) и исследуемого материала (неспецифическая реакция).

После вскрытия флаконов компоненты Набора реагентов «СТАФ-ТЕСТ» можно хранить в упаковке производителя с плотно закрытыми крышками при температуре от 2 до 8 °С и использовать в течение срока годности.

9. Форма выпуска

• Диагностикум для идентификации коагулазо-положительных стафилококков - 1 фл. – 2,5 мл;

• Отрицательный контрольный диагностикум (К-) - 1 фл. – 2,5 мл.

Два флакона в картонной пачке с инструкцией по применению.

10. Срок годности 8 месяцев.

По истечении срока годности набор использованию не подлежит.

11. Условия хранения и транспортирования

Хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С. Транспортируют при температуре не выше 25 °С в течение не более 14 суток. Не замораживать!

12. Условия отпуска

Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений. 

Диагностикумы для выявления стрептококков групп D, F в реакции коагглютинации, жидкие

Состав набора:

Диагностикумы D, F - представляют собой 2,5% взвесь инактивированных клеток Staphylococcus aureus Cowan – I в разводящем буфере, сенсибилизированных специфическими иммуноглобулинами к соответствующим группоспецифическим полисахаридным антигенам стрептококков групп D и F. Диагностикумы окрашены метиленовым синим.

Дополнительные реагенты для постановки реакции коаглютинации:

• Отрицательный контрольный образец (К–) - представляет собой 2,5 % взвесь инактивированных клеток Staphylococcus aureus Cowan – I в разводящем буфере, сенсибилизированных иммуноглобулинами нормальной сыворотки крови кролика и окрашенных метиленовым синим;

• Положительный контрольный образец (К+) – раствор, содержащий группоспецифический полисахаридный антиген стрептококка соответствующей группы;

• Экстрагирующий раствор № 1;

• Экстрагирующий раствор № 2 .

Описание. Диагностикумы D, F и Отрицательный контрольный образец (K–) - гомогенные взвеси синего цвета, которые при стоянии разделяются на плотный осадок синего цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и прозрачную голубую надосадочную жидкость. Положительный контрольный образец (K+) – прозрачная бесцветная жидкость. Экстрагирующие растворы №1 и №2 – прозрачные бесцветные жидкости.

Назначение.

Наборы реагентов «СТРЕП-ТЕСТ D, F» предназначены для идентификации стрептококков групп D или F, выделенных от больных и носителей, в реакции коагглютинации.

Наборы реагентов «СТРЕП-ТЕСТ D, F» рассчитаны на проведение 50 анализов.

Способ применения. Все реагенты для проведения анализа перед использованием должны быть выдержаны не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 °С.

Приготовление экстракта антигенов, используемого для анализа.

1. Экспресс-метод – материал, взятый с помощью тампона непосредственно у пациента из зева, носа, с поверхности кожи или другого источника инфекции.

Тампон диаметром 3-5 мм с материалом от пациента помещают в коническую пробирку, куда одновременно добавляют в равных количествах по 0,15 – 0,25 мкл каждого из экстрагирующих растворов № 1 и № 2, тампон несколько раз проворачивают в пробирке. Далее пробирку выдерживают не менее 1 мин в кипящей водяной бане или не менее 15 мин в термостате при температуре 37 оС, или не менее 30 мин при комнатной температуре. Затем тампон удаляют, тщательно отжимая его о стенки пробирки. Полученный экстракт (охлаждённый до комнатной температуры в случае экстракции на водяной бане) используют в качестве антигена в реакции коагглютинации.

Внимание! При необходимости чувствительность методики может быть повышена при уменьшении объема экстрагирующей смеси, а также при удлинении времени экстракции.

2. При бактериологическом обследовании пациентов на гемолитический стрептококк для анализа используют:

- первичный посев материала, взятого у пациента, на 5 % кровяной агар в чашке Петри – с преобладанием колоний гемолитического стрептококка,

- чистую культуру стрептококка на 5 % кровяном агаре (достаточно 3-5 колоний чистой культуры стрептококка).

Бактериальный материал переносится в коническую пробирку, куда одновременно добавляют в равных количествах по 0,1-0,15 мл экстрагирующих растворов № 1 и № 2. Дальнейшая обработка образца выполняется аналогично описанной выше для тампона.

Постановка реакции коагглютинации.

СТРЕП-ТЕСТ предназначен либо для подтверждения принадлежности исследуемой культуры какой-либо серогруппе, либо для определения групповой принадлежности исследуемой культуры стрептококка.

Для определения групповой принадлежности исследуемой культуры стрептококка используют Набор реагентов D, F вместе с Набором реагентов СТРЕП-ТЕСТ А, В, С, G (комплексный).

Для подтверждения принадлежности к предполагаемой группе D или F стрептококка используют Набор реагентов СТРЕП-ТЕСТ D, F.

Для этого Диагностикум и Отрицательный контрольный образец (К–) тщательно взболтать до образования однородной суспензии.

На обезжиренном предметном стекле выделить две зоны. В первую внести одну каплю Диагностикума предполагаемой группы (D или F), во вторую– одну каплю Отрицательного контрольного образца (К–). К обеим каплям добавить по 1 капле экстракта от исследуемого больного.

Каждую пробу тщательно перемешать отдельной палочкой, затем осторожно покачивать стекло круговыми движениями. Учёт результатов реакции произвести в течение 2-х мин.

Для правильного учета реакции поставить контроли: Диагностикум D или F и Отрицательный контрольный образец (К–) c 0,9 % раствором натрия хлорида. Полученная реакция должна быть отрицательной, считать данную реакцию фоновой.

Для контроля Диагностикумов на отдельном стекле смешать 1 каплю Диагностикумов D или F и каплю Положительного контрольного образца (К+ D или F соответственно).

Данный контроль ставится однократно для каждой новой партии диагностикумов.

Учет результатов.

Учёт результатов реакции проводят при нормальном освещении без использования оптических приборов. Реакцию оценивают так:

- полная коагглютинация с полным просветлением фона 4+;

- хорошо выраженная коагглютинация с полным просветлением фона 3+;

- выраженная коагглютинация с неполным просветлением фона 2+;

- слабо выраженная коагглютинация с неполным просветлением фона 1+.

Исследуемый материал расценивается как положительный в отношении той серогруппы стрептококка, где реакция коагглютинации с соответствующим диагностикумом оценивается не менее, чем 2+; при отрицательной реакции коагглютинации исследуемого экстракта с Отрицательным контрольным образцом (К–).

Взаимодействие Положительного контрольного образца с диагностикумом должно давать реакцию коагглютинации не менее, чем 3+.

Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следующих условий:

- хранить все компоненты при температуре от 2 до 8 °С в герметично укупоренном виде;

- не замораживать;

- не смешивать компоненты разных серий;

- не использовать компоненты с истекшим сроком годности.

Форма выпуска

Набор реагентов для выявления стрептококков группы D

Диагностикум D - 3,0 мл 1фл.

Отрицательный контрольный образец (К–) - 3,0 мл 1фл.

Положительный контрольный образец (К+) D - 2,0 мл 1фл.

Раствор для экстракции №1 - 20,0 мл 1фл.

Раствор для экстракции №2

В картонной пачке с инструкцией по применению. - 20,0 мл 1фл.

Набор реагентов для выявления стрептококков группы F

Диагностикум F - 3,0 мл 1фл.

Отрицательный контрольный образец (К–) - 3,0 мл 1фл.

Положительный контрольный образец (К+) F - 2,0 мл 1фл.

Раствор для экстракции №1 - 20,0 мл 1фл.

Раствор для экстракции №2

В картонной пачке с инструкцией по применению. - 20,0 мл 1фл.

Срок годности. 8 месяцев.

По истечении срока годности набор использованию не подлежит.

Условия хранения и транспортирования. Хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С. Транспортируют при температуре не выше 25 °С в течение не более 14 суток. Замораживанию не подлежит!

Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений. 

1. Назначение

Идентификация в реакции преципитации стрептококков групп А, В, С, D, F, G, выделенных из клинического материала от больных и носителей.

Набор сывороток рассчитан на проведение 50 анализов для каждой группы.

2. Характеристика набора

2.1. Принцип действия

Сыворотки для идентификации стрептококков групп А, В, С, D, F, G получены путем иммунизации кроликов вакцинами, приготовленными из референс-штаммов стрептококков серологических групп А, В, С, D, F, G и предназначены для групповой идентификации гемолитических стрептококков в реакции преципитации. При идентификации групповой принадлежности гемолитических стрептококков, выделенных от больных и носителей, необходимо в качестве контроля использовать стандартный препарат, содержащий групповой полисахарид, полученный по методу Фуллера (форма-мидная экстракция микробных клеток ).

2.2. Состав набора:

- Кроличьи групповые антистрептококковые сыворотки, жидкие;

- Экстракты группового полисахарида соответствующих референс-штаммов стрептококков, полученные по методу Фуллера.

3. Описание

Кроличьи групповые антистрептококковые сыворотки – опалесцирующие жидкости желтоватого цвета; экстракты группового полисахарида соответствующих референс-штаммов стрептококков, полученные по методу Фуллера,- прозрачные бесцветные жидкости.

4. Меры предосторожности.

4.1. Потенциальный риск применения набора – класс 1.

4.2. Все компоненты набора являются нетоксичными.

4.3. При работе с набором следует соблюдать “Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

4.4. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны быть соответствующим образом промаркированы и храниться отдельно.

4.5. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в помещениях, предназначенных для работы с набором.

4.6. При подготовке к проведению анализа следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом:

- работать в резиновых перчатках,

- не пипетировать растворы ртом.

- все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 и МУ-287-113.

5. Оборудование и материалы.

При применении набора для постановки анализа используют:

- термостат, поддерживающий температуру 37±1°С;

- холодильник бытовой;

- пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющими отбирать объемы жидкости от 5 до 5000 мкл (погрешность не более 5%);

- перчатки резиновые хирургические;

- бумага фильтровальная лабораторная;

- флаконы стеклянные вместимостью 15 мл;

- пробирки вместимостью 2 мл;

- цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 1000 мл;

- колба вместимостью 1000 мл;

- вода очищенная.

6. Способ применения.

6.1. Методы экстракции группового антигена из исследуемой культуры стрептококка.

6.1.1 Метод Фуллера (формамидная экстракция):

18-20 часовую культуру стрептококка, выращенную в 10 мл среды Тодд-Хевит при 37°С, центрифугируют в течение 20-30 минут при 1500g; осадок микробных клеток суспендируют в 0,2 мл формамида и выдерживают в течение 10 минут при 160°С в масляной бане; быстро охлаждают; добавляют 0,5 мл кислого этилового спирта (на 49мл этилового спирта 1,0мл концентрированной соляной кислоты); выдерживают 15-20 минут до образования преципитата; центрифугируют в течение 30 минут для осаждения преципитата; отделяют супернатант от осадка и добавляют к супернатанту 1-2 мл ацетона для образования преципитата, который осаждают центрифугированием; полученный преципитат растворяют в 0, 6 мл физиологического раствора и доводят рН раствора до 7,2, используя 0, 2М раствор NaОН.

6.1.2. Метод Ленсфилда (экстракция соляной кислотой):

Осадок, полученный после центрифугирования 30-40 мл бульонной (среда Тодд-Хевит) культуры стрептококков, суспендируют в 0,35мл 0,2М НСl; выдерживают суспензию в кипящей водяной бане (100°С) в течение 10 минут; охлаждают и нейтрализуют до рН 7,2.

6.2. Методы групповой идентификации стрептококков групп А, В, С, D, F, G

6.2.1. Преципитация в капилляре (внутренний диаметр стеклянного капилляра 0,5-1,2мм, длина 2-8мм): конец капилляра опускают в группоспецифическую сыворотку для заполнения капилляра на 1см, затем конец капилляра опускают в исследуемый стрептококковый экстракт для заполнения капилляра еще на 1 см; капилляр закрепляют в пластилиновом штативе сывороткой над экстрактом. Реакция учитывается через 2 минуты при комнатной температуре. Реакция, появляющаяся после 30 минут, не учитывается. В качестве контроля служит реакция группоспецифической сыворотки со стандартным групповым полисахаридом соответствующего референс-штамма стрептококка.

6.2.2. Реакция кольцепреципитации (используется часть пастеровской пипетки с внутренним диаметром около 0,5см, длиной 3-4 см и запаянным коническим концом,: капилляр устанавливается в штатив с пластилином): в капилляр вносится порядка 20-25мкл группоспецифической сыворотки, на которую осторожно наслаивается 20-25 мкл стрептококкового экстракта. Реакция кольцепреципитации (кольцо преципитации на границе экстракта и иммунной сыворотки), учитывается в течение 5 минут. Реакция, появляющаяся после 5 минут, не учитывается как положительная. В качестве контроля служит реакция группоспецифической сыворотки со стандартным групповым полисахаридом соответствующего референс-штамма стрептококка.

6.2.3. Преципитация в агаровом геле. Используется высокоочищенный 1% агар в забуференном фосфатами физиологическом растворе (ФБС). Расплавленный агар наносится высотой 1 мм на обезжиренное предметное стекло для микроскопа или на дно чашки Петри, которые помещаются во влажную камеру. Перед постановкой реакции преципитации в агаровом геле отсасывают лунки - одна в центре и 6 по периферии – диаметром 3мм и расстоянием между центрами центральной и периферических лунок 7,5мм. В центральную лунку вносят групповую сыворотку, в периферические – испытуемые экстракты, включая экстракт из соответствующего референс-штамма стрептококка. Объем вносимого материала- 2-10 мкл. Реакция учитывается через 18-20 часов при инкубации при комнатной температуре или через 48 часов при инкубации при температуре 4°С. В случае идентичности антител сыворотки, внесенной в центральную лунку, и антигена в какой-либо периферической лунке в прозрачном слое агара между этими двумя лунками образуются полоски (дуги) из выпавшего преципитата. В качестве контроля служит реакция группоспецифической сыворотки со стандартным групповым полисахаридом соответствующего референс-штамма стрептококка.

7. Форма выпуска.

- Кроличьи групповые антистрептококковые сыворотки

(А, В, С, D, F, G) по 1 фл.- 1,0мл;

- Экстракты группового полисахарида соответствующих

референс-штаммов стрептококков по 1 фл.-0,5мл.

- Инструкция по применению.

8. Срок годности.

Срок годности набора – 12 месяцев со дня приемки ОБТК предприятия-изготовителя.

По истечению срока годности набор использованию не подлежит.

9. Условия хранения и транспортирования.

Транспортирование набора должно проводиться при температуре от 2 до 8 °С. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 20 °С не более 10 дней.

Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно производиться при температуре от 2 до 8 °С.

10. Условия отпуска.

Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений.